德乐DOHLER德国德乐NBB培养基NBB-A

NBB-A—NBB-Agar，固体琼脂培养基，经过简单的熔化过程即可倒入板中。可用于膜过滤，拭子和倾倒板法以及空气中微生物的收集

通过指示器从红色变为黄色的简单直观检查

NBB-A培养基使用方法：

1．培养

用沸水或高压蒸汽液化培养基。在液化时应避免超长时间和过度的加热。已液化的培养基应立即倒入平板中（约15毫升）,储存在冰箱中，并应在随后几天内使用(不应长期储存)。

恒温25-28℃在厌氧环境下(CO2)培养。如果样品中有大量的啤酒有害菌，那么，在1-5天内培养基中的酸碱指示剂将因产酸而变黄。

在样品中只有很少量的啤酒有害菌的情况下，NBB-A培养基只有菌落周边区域变黄。并且颜色的改变需4-6天发生。

NBB-A培养基的培养时间比别的培养基相比短得多。恒温培养时间取决于以下因素：微生物的生长速率(取决于种属)、菌龄、生理条件以及培养的环境、微生物的起始细胞数。

啤酒有害菌的菌落形态：在短时间的恒温培养之后，菌落是透明无色的乃至接近白色。在较长的恒温培养之后，菌落呈白色至黄色，菌落直径在0.5-3.0mm之间。

2．对NBB-A使用效果的评价此培养基使用于培养已发现的所有的啤酒有害菌，特别适合于乳酸杆菌、四联球菌以及果胶杆菌和巨球菌。在培养果胶杆菌和巨球菌时，必须是绝对的厌氧条件。

伴生细菌：酵母在NBB-A培养基上只能极其微弱的生长或根本不能生长。非啤酒有害菌在NBB-A上生长的概率很小（例如：小球菌、醋酸菌，在非厌氧条件下可能长出）。当伴生细菌生长时，因为它们是非啤酒有害菌，所以通常NBB不变黄。同时，在NBB-B上伴生的生长是非常微弱缓慢的。并且，这些细菌在啤酒或酿造酵母中出现的几率也非常小。

3．应用

a)酵母样品

取0.1至1.0ml酵母样品涂布,接种在NBB-A平板上。要求涂层薄而均匀，被涂上的酵母几乎不在NBB-A上进一步生长，相反，酵母样品中存在的啤酒有害菌却生长良好，因此，很容易在显微镜下看出来。在大多数情况下，特别是在强烈感染啤酒有害菌的情况下，NBB-A变黄。

b)啤酒样品（清酒、成品酒、水样）

膜过滤后，把过滤膜放在NBB-A平板上。

*好用普通孔径（0.45um）的白色过滤膜。

NBB-B：液体培养基，用于检测酵母样品的，带有指示剂染料的液体培养基，用于检测酵母样品中的啤酒变质微生物或作为富集培养基。

直接使用液体介质，通过指示器从红色到黄色的简单直观的筛选。

NBB-B培养基使用方法：

    NBB-B应该重新分装在无菌试管中(约10-20ml),在无菌状态下分装或分装后再次短时杀菌。短时杀菌时应避免强热，因为强热使已形成的轻微的蛋白质沉淀加强，同时颜色指示剂颜色加深，*后其他营养物质和酒花苦味物质也受到不好的影响。培养*好在厌氧(CO2)或含氧量低的环境下进行,25-28℃培养2-5天。为保证气体的交换，试管应使用一个透气的塞子(棉塞或海绵等产品)。

a)酵母样品

约0.5ml酵母样品置于10mlNBB-B中进行恒温培养。按此比例可以用更多的NBB-B来检测更多的样品量。在酵母被NBB-B抑制生长的同时，啤酒有害菌迅速的生长，能够很容易地在显微镜下看出来。并且通常在有啤酒有害菌的情况下，NBB-B会变黄。在某些时候NBB-B变黄不彻底，或者根本不变黄，虽然样品中有害的四联球菌存在，这是因为样品仅有极轻微的污染或自溶的酵母产碱防碍了指示剂变黄。

b)啤酒样品

将过滤膜放在NBB-B中恒温培养。当啤酒有害菌存在时，产生混浊、沉淀或混浊沉淀同时产生，同时NBB-B显著变黄。

NBB-C：浓缩的液体培养基，通过添加酵母浑浊的啤酒样品可以调节所需的选择性，具有更高选择性的液体培养基。只需添加到啤酒样品中进行分析，*终显微镜检查，无指标验证

NBB-C培养基使用方法：

将啤酒样品（100-150ml）装入180ml取样瓶中，加5%NBB-C（约8ml)然后用无菌水填满取样瓶。

NBB-C可以进一步用来检查在水或麦汁中的啤酒有害菌。为此，先将样品（约50ml）装入180ml取样瓶中，加5%NBB-C，然后用巴氏杀菌的啤酒补满取样瓶（不要使用太高苦味值的啤酒）。

加过NBB-C的样品必须在26-28℃培养4-8天。NBB-C不含酸碱颜色指示剂，但是啤酒有害菌生长非常迅猛，很容易在显微镜下识别出来。样品有很高的选择性，因此，伴生的非啤酒有害菌不能生长。

NBB-P使用方法：

NBB-P：盒装半成品粉末用于配置NBB-B和NBB-A。更经济的解决方案。

配置方法：

称量60gNBB-P粉末倒入0.5L啤酒中，用蒸馏水补足到1L。加热到80℃溶解，然后冷却到25℃，测其PH值。用氢氧化钠调PH值至5.80。

（注意：不能滴定过度，如用氢氧化钠调PH值太高，此溶液只能倒掉，不能用盐酸中和。）

1、配置NBB-B

将上述调配好的溶液分装到带棉塞的试管中，（试管*好先灭菌过），每支试管中分装10ml NBB-B溶液。然后在0.5bar灭菌10min即可。

2、配置NBB-A

在上述调配好的溶液中加1.5%的无水琼脂（1.5g/100ml），短时煮沸溶解，然后趁热分装到250ml三角瓶或试管中（用于穿刺培养），包扎好，0.5bar灭菌10min。灭菌后，分装到三角瓶中的NBB-A趁热到平板。

保存：

NBB-B和NBB-A灭菌完后要送到恒温培养箱25-28℃有氧培养2天，若无细菌生长，即可放入冰箱中备用。在平板外面每10套包扎一层锡箔纸，试管则若干支试管外面包裹牛皮纸，于4℃左右保存。所制备出的培养基不应长期保存，*好在两周之内用完。